Solution de la protéinase K

Catégorie de biologie moléculaire, pour l'usage de recherches seulement

Cat No. N9012

Composants

Stockage

-20ºC a recommandé. La durée de conservation de la solution de la protéinase K est d'un an une fois stockée scellé au-dessous de 4ºC. La solution de la protéinase K est embarquée sur de bio vessies de glace ou à la température ambiante.

Description

La protéinase K est une protéase endolytic qui fend des liens de peptide sur les côtés carboxyliques des acides aminés aliphatiques, aromatiques ou hydrophobes. La protéinase K est classifiée comme protéase de sérine. Le plus petit peptide à hydrolyser par cette enzyme est un tétrapeptide.

Caractéristiques

• Solution prête à employer

• Protéinase de recombinaison K

• Actif dans un large éventail de produits de réaction

Applications

• Isolement de l'ADN genomic des cellules cultivées et des tissus

• Retrait des DNases et du RNases en isolant l'ADN et l'ARN des tissus ou des variétés de cellule

• Détermination de la localisation d'enzymes

• Amélioration de l'efficacité de clonage des produits d'ACP

Contrôle de qualité

Activité de DNase : Aucun activité enzymatique décelable après 6 heures d'incubation avec de l'ADN de λ à 37ºC.

Activité de RNase : Aucun activité décelable de ribonucléase après 16 heures d'incubation avec de l'ARN à 25ºC.

Source

Des cellules de levure avec le gène copié codant génétiquement a machiné la protéase endolytic d'album d'Engyodontium (album de Tritirachium).

Poids moléculaire

monomère du kDa 29,3.

Définition d'unité d'activité

Une unité de l'enzyme libère les acides aminés Foline-positifs et les peptides correspondant à 1 tyrosine de µmol en 1 minute à 37°C, pH 7,5 utilisant l'hémoglobine dénaturée comme substrat.

On analyse l'activité enzymatique dans le mélange suivant : Phosphate de potassium de 0,08 M (pH 7,5), urée de 5 M, 4 millimètres de NaCl, 3 millimètres de CaCl2 et 16,7 mg/ml hémoglobine.

Tampon de stockage

L'enzyme est fournie dedans : Tris-HCL de 50 millimètres (pH 7,5), contenant Ca²⁺ et glycérol comme stabilisateurs.

Inhibition et inactivation

Inhibiteurs : La protéinase K n'est pas inactivée par des chélateurs en métal, par les réactifs thiol-réactifs ou par les inhibiteurs spécifiques de trypsine et de chymotrypsine. Le fluorure de Phenylmethylsulfonyl et le phosphorofluoridate diisopropylique empêchent complètement l'enzyme.

Inactivé par la chauffage à 95°C pendant 10 minutes.

Note

• Activité optima à 50-55°C.

• La dénaturation rapide de l'enzyme se produit aux températures au-dessus de 65°C.

• La concentration fonctionnante recommandée pour la protéinase K est de 0.05-1 mg/ml. L'activité de l'enzyme est stimulée par 0.2-1% SDS ou par l'urée de 1-4 M.

• Ca²⁺ protège la protéinase K contre l'autolyse, augmente la stabilité thermique et a une fonction de réglementation pour l'accepteur de substrat de la protéinase K.

• Écurie sur un grand choix de pH : 4.0-12.5, pH optimum 7.5-8.0.

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